La Fosfatasa Ácida Prostática (AP) en la detección de manchas de semen:

El ensayo de la AP detecta la presencia de una enzima que se encuentra en niveles especialmente elevados en el semen humano, la fosfatasa ácida. 

El principal obstáculo de este ensayo, es que el fluido vaginal puede tener algún tipo de actividad de la AP y, aunque suelen dar valores diferentes en el ensayo, en ocasiones puede ser confundido con lo que podría esperarse en semen diluido, también puede detectarse esta actividad enzimática elevada en sangre de pacientes masculinos con cáncer de prostata. Por lo que muchos laboratorios están adicionando un inhibidor especifico de la enzima AP prostatica, el buffer tartrato o ácido tartárico.

La prueba de la AP practicada por la mayoría de los laboratorios forenses, prácticamente se realiza como fue descrito por primera vez hace 50 años por Stuart Kind, aunque existe una serie de variaciones sobre el tema. Este ensayo implica el uso de un papel de filtro humedecido con una solución buffer sobre la muestra de presunta naturaleza seminal, la presión aplicada da lugar a la transferencia de agua hacia la mancha de la muestra de semen hacia el papel (si éste está presente), luego se emplea el reactivo para la detección de la AP. 

Según la bibliografia, si el reactivo no cambia de color después de 2 minutos, la prueba debe ser considerada negativa, sin embargo, cuanto más tiempo se deje reaccionar la AP, mayor será la sensibilidad de la prueba. 

Otra variable a considerar en los experimentos es la cantidad de agua utilizada para macerar la muestra y los elementos que deben ser humedecidos: ¿el papel, la muestra, o las dos cosas?, generalmente, la reacción parece ser más rápida cuando la muestra esta mojada, pero se ha detectado semen en telas húmedas y secas. No hay conclusiones definitivas sobre si el tipo de tejido puede afectar los resultados. 

En otra serie de análisis, se sembró sobre ropa intima de dama una serie de diluciones de semen fresco y se colocaron en bolsas de papel en un armario por una semana. Estas fueron analizadas mediante el método "blot" para la AP (un método por aspersión con un aerosol) con aplicación directa del reactivo.

Algunas pruebas también se han llevado a cabo para tratar de establecer si el ensayo de la AP tiene algún efecto adverso sobre la probabilidad de obtener perfiles de ADN. Al parecer, el método no afecta la absorción de hematoxilina y eosina (usada en la tinción de células espermáticas), ni la capacidad de recuperar perfiles STRs del ADN. También hay una serie de proyectos en curso para conocer si la edad de la mujer puede ser un factor determinante en los resultados en la prueba de la AP. Las pruebas se están llevando a cabo en fluido vaginal mezclado con semen y colocado en ropa intima femenina usada por un día. Un grupo de mujeres de diferentes edades y diferentes momentos de su ciclo menstrual han proporcionado las muestras, y todavía hay una gran cantidad de investigación por hacer.

Por último, se debe tomar en cuenta que como cualquier enzima, la AP es susceptible a cambios de pH, temperatura, humedad y es sensible a radiaciones UV, por lo que el empleo de otros ensayos es recomendable para descartar falsos negativos por alteración de las condiciones favorables de la actividad enzimática.